,内标多采用人工制备的竞争性内标。内标可以监控每一扩增孔中假阴性的产生情况。口前的商品试剂盒大部分没采用内标方法质控。因此在测定血清/血浆病原体核酸如HBVDNA、HCVR'A等时,应使用已知的弱阳性血清/血浆作为质控样本,与待测临床标本等同处理捉取核酸及扩增,以判断逆转录及扩增检测的效果。使用这些外加弱阳性质控不但可检测扩增反应液的质量,还可获得有关PCR试剂的检测下限和特异性的信息。这些质控样本在扩增检测时必须使用与患者的标本相同的主反应混合液。每一个PCR实验中都必须设有外加阴性质控(污染监测质控),为判断扩增过程屮污染出现的阶段,阴性质控可包括如下几种,即在样品制备的整个过程屮所带的空白管、仅有扩增反应液但不含扩增模板的反应管、阴性标木等。阴性标本可以评估PCR实验的综合质量。在扩增靶RNA的RT-PCR实验屮,可做省略逆转录的污染质控,通过这种方法,可发现以前扩增的DMA片段所引起的污染。(3)板上杂交和膜上斑点印迹杂交的质控:在板上杂交和斑点杂交时,阳性和阴性质控应该在同一板或膜上与病人标本平行进行分析,这可排除不同反应中因使用不同杂交条件所致的对结果的错误解释。(4)测定结果的评价与报告:采用实时荧光定量PCR检测方法,在判断结果时,应先对扩増的荧光信号作岀定性判断,然后再进行定量分析,避免一些非特异荧光信号对结果分析的干扰。结果的报告必须简单清楚。定性测定报告邙日性〃或〃阴性〃即可。定量测定则必须报告量的多少,如结果高于测定方法线性范围上限,则对样本稀释后再测,结果乘上稀释倍数;如结杲低于方法的测定范围卜•限,则报?It;多少即可,不能报告为〃0〃或〃阴性〃。2、室间质量评价所有开展临床基因扩增检验的实验室都必须参加由卫牛部临床检验中心组织的全国临床基因扩增检验项目的室间质量评价,评价结呆将作为其开展临床基因扩增检验的依据Z-o本工作规范自公布之FI起实施。
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