波长稍高。仪器与试剂仪器:紫外可见分光光度计、电子分析天平、电热恒温干燥箱、恒温水浴锅、称量瓶、量瓶、移液管、具塞试管。试剂:无水葡萄糖、无水乙醇、硫酸、苯酚。对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0.1g,置100mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取5mL置50mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得每1mL含0.1mg的对照品溶液。标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL,分别置10mL具塞试管中,各加水补至1.0mL,精密加入5%苯酚溶液l.0mL(临用配制),摇匀,再精密加硫酸5.0mL,摇匀,置沸水浴中加热20分钟,取出,置冰浴中冷却5分钟,以相应试剂为空白,照紫外-可见分光光度法,在488nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约3.0g,精密称定,加水200mL,加热回流2小时,放冷,转移至250mL量瓶中,用少量水分次洗涤容器,洗液并入同一量瓶中,加水至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液2.0mL,置15ml离心管中,精密加入无水乙醇10.0mL,摇匀,冷藏过夜,取出,离心(转速为每分钟4000转)20分钟,弃去上清液(必要时滤过),沉淀加热水溶解,转移至25mL量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,即得。测定法精密吸取供试品溶液1mL于10mL的具塞试管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“精密加入5%苯酚溶液1.0mL”起,依法测定吸收度。计算公式C—对照品溶液浓度(μg/mL)W-供试品重量(g)注意事项本方法根据《中华人民共和国药典》2015年版一部铁皮石斛中多糖的含量测定方法,并结合本产品实际情况而制定。所用试剂苯酚本身应为无色,若颜色变红则不可再用,其5%溶液需新鲜配制。硫酸的浓度直接影响显色,故已吸收水分的硫酸不宜使用。
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