37℃下的恒温培养箱中培养16 h~24 h。取出后观察溶液的澄清度,培养液澄清的最低中药浓度为板蓝根多糖的MIC。Р3 结果与讨论Р3.1 标准曲线Р葡萄糖的标准曲线如图1所示: Р图1 葡萄糖标准曲线Р由图1可以看出,以葡萄糖为标准品制作的标准曲线,其回归方程为C(μg/mL)=0.06A490 + 0.00139,相关系数为R2=0.997,在测得样品中多糖的含量后,按下式计算样品中多糖提取率。Р多糖提取率(%) = 粗多糖中多糖质量/预处理板蓝根粉的质量× 100%Р3.2 单因素实验Р3.2.1 超声时间对提取率的影响Р图 2 提取时间对板蓝根多糖提取率的影响Р从图2可以看出,在超声处理10 min~40 min时多糖的得率随时间的延长有明显的提高,表明超声波能在短时间内破碎细胞,使存在于板蓝根细胞壁和细胞壁之间的多糖物质释放出来。当提取时间在40 min左右时多糖得率增长缓慢,提取时间超过40 min后提取率反而下降。可能的原因是超声波形成的机械振动有较强的剪切力,使得大分子多糖断裂成小的片段,从而在后处理的过程中损失增大而使得率降低。另外,在测定多糖含量的过程中可以发现当提取时间超过40 min时,粗多糖中的多糖含量略微降低,可能的原因是板蓝根细胞经过长时间的超声破碎,细胞内的色素以及其他一些可溶性杂质混入提取液。因此初步确定多糖的超声提取时间在40 min左右。Р3.2.2 提取温度对提取率的影响Р图3 提取温度对板蓝根多糖提取率的影响Р从图3可以看出,当提取温度低于50℃时,提取率很低,高于50℃时提取率有显著提高,但是当提取温度继续升高,超过60℃时提取率却不再增加。说明温度对于提取过程有明显的促进作用。但是考虑到温度过高可能会对多糖活性有破化作用,同时温度过高给后续操作带来不便,成本费用增加。故提取温度应为60℃左右。Р3.2.3 料水比对提取率的影响
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