,加入2ml Buffer GPS至柱子中,静置3-10min。室温3000- 5000xg离心5分钟。去滤液,把柱子重新放回收集管中。Р7. 将裂解液倒进预先准备好的针筒过滤器中(针筒开口朝上,下面出口处接收集管),静置2min。Р8. 插入并轻推活塞使裂解液流进下面的收集管中。Р9. 在过滤澄清的裂解液中加入1/10体积的ETR,颠倒7-10次后溶液变得浑浊,冰浴10-20min。Р10. 42°C水浴5min后,25°℃,3,000-5,000xg离心5min, ETR溶液将在管底形成蓝色分层。离心后,如果溶液中有大量的液滴悬浮,静置10分钟让液滴自然沉降。Р11. 转移上清液移至离心管中,加入0.5倍体积无水乙醇(室温),混匀后室温静置1-2min。Р12. 将HiBind 中量柱裝在15ml收集管中。转移20ml混合液至柱子內,室温下3,000-5,000xg离心3-5 min,倒去滤液。Р13. 重复该第12步骤,把剩余的过滤液转移至柱子,直至所有的溶液都从柱子滤出。Р14. 把柱子重新装回收集管,加入3ml HB Buffer,按上述条件离心,弃滤液。Р15. 把柱子重新装回收集管,加入3.5ml DNA Wash Buffer,按上述条件离心,弃滤液。Р16. 重复步骤15一次。Р17. 弃去滤液,把柱子重新装回收集管,最大速度(<6000xg)离心10-15min以甩干柱子基质。Р18. (可选)进一步干燥柱子,将柱子从收集管中取出,用真空抽滤装置抽干柱子10min后,也可在真空烘箱或65°C 干燥10min后重复步骤17。Р19. 把柱子装在干净的15ml离心管上,加入70°C预热的0.5-1ml Endotoxin free Elution Buffer到柱子基质上(所加的量取决于预期终产物浓度),室温下静置2min后最大速度离心5min以洗脱DNA。
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