用减弱而能相互靠拢,聚集起来;Р②由于中性盐的亲水性比蛋白质大,盐离子在水中发生水合而使蛋白质脱去了水合膜,暴露出疏水区域,由于疏水区域的相互作用,使其沉淀。Р结合SDS PAGE电泳的分离原理说明未知蛋白质分子量的测定方法;Р答:以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGE电泳得到不同标准蛋白的电泳迁移率,制作标准曲线,然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGE电泳,测定迁移率,从标准曲线得到相应的分子量。Р请说明在进行SDS PAGE电泳之前,样品的处理方法,并解释其原因;Р答:样品处理方法:加入SDS和还原剂DTT.Р 原因:SDS-PAGE由于加入了SDS和强还原剂,破坏了蛋白质分子的高级结构,并与蛋白质形成带大量负电荷的聚合物,消除了不同蛋白质分子电荷及分子形状的差异,而仅将分子量差异作为分离的依据,常用于测定未知蛋白质的亚基分子量。Р简述载体两性电介质梯度等电聚焦(IEF)的分离原理;Р答:在支持介质中加入载体两性电解质,通以直流电后在两极之间形成稳定、连续和线性的pH梯度,当带电的蛋白质分子进入该体系时,便会产生移动,并聚集于相当其等电点的位置。Р何谓反渗透膜分离,其特点是什么?Р答:反渗透过程是用一种半透膜把两种不同浓度的溶液隔开,只是纯溶剂通过膜,而低分子量的化合物被截留。因此,操作压力比超滤大得多。Р特点:操作压力大,适用于小分子物质浓缩,最常用于纯水的制备。Р结晶的必备条件是什么?Р答:溶液达到过饱和状态Р细胞破碎时应注意的事项有哪些?Р离子交换分离单元的基本过程有哪几部分?Р答:①样品准备②离子交换剂和层析剂的制备③上样④目的蛋白的洗脱⑤洗脱液的鉴定和回收⑥离子交换剂的再生和储存Р简述反相色谱分离原理;Р答:在层析支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类,洗脱液用极性强的溶剂,则被分离样品中的极性强的物质不被吸附,最先洗下来,得到较好的分离效果。
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