持一定角度并轻轻摇动直至松动所有的细胞,然后反复倾斜试管,直至呈现均匀的细胞悬液(阴性)或凝集物(阳性)为止;再进行初步结果判读。Р 对初判为阴性结果的,再在试管中加入1滴阳性对照细胞,进行再离心、再悬浮和再判读结果。如果在制备阳性对照细胞悬液时,能充分去除所有未结合的球蛋白,则此步对照试验结果为阳性。(此步对照很关键,它是检测细胞是否洗涤充分的唯一方法。) 2Р ⑧阳性对照细胞(IgG抗D致敏细胞)制备:Р 取1份市售抗D(IgG)试剂(效价≧1:8),加入1份Rh(D)阳性O型红细胞,混匀后置37℃水浴30分钟,再用生理盐水洗涤3次[3400转/分钟(1000g),每次离心1分钟,离心后将上清液全部倒出],最后配成3%红细胞悬液备用。Р 12.结果判断Р 出现红细胞凝集为阳性反应,表示红细胞上有相应抗体存在;Р 红细胞不凝集为阴性反应,表示红细胞上没有相应抗体存在。Р 13.质量控制与注意事项Р ①红细胞洗涤不充分,微量残留的未结合的球蛋白将中和抗人球蛋白试剂,影响试验结果的准确性。Р ②直接抗人球蛋白试验的试管在初读结果之后,应再放在室温中Р5~10分钟,这样孵育后,对C3d或IgA致敏红细胞有增强作用,重新离心后观察结果可使初判的阴性结果转变为阳性结果;而IgG致敏的红细胞在孵育后反应可能会更弱。Р ③试剂中含有0.1%W/V叠氮钠,若摄入人体会引起中毒。Р ④直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d)为体外诊断试剂。Р ⑤抗IgG可用于抗体筛选和相容性试验中,但其有一定的局限性,使用抗IgG测定抗体偶尔会失败,可依靠含有抗C3成分的多价抗球蛋白试剂测定,没有被IgG测得的抗体在某些病例中可能有临床意义。Р ⑥对每批新试剂或在4℃保存时间过长的试剂,需做阳性对照试验,至少每月一次。⑦制备的阳性对照细胞(IgG抗D致敏细胞),限当天制备当天使用。Р XXX医院输血科Р 3
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