0 min~1 h,进口ELISA试剂盒则通常为37℃,1~2 h 能有较完全的结合。 2.1温育时间、温度的选择一般根据试剂盒的说明书选择温育的时间、温度。加完样本和(或)试剂后将微孔板从室温放入水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃需要一定时间,如果是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就容易造成实际测定中温育时间不够,易致弱阳性标本测不出来。控制方法:①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;②用1个小Р 温度计放置在板孔反应液中测量观察。 2.2 “边缘效应”的排除“边缘效应”是在使用96 孔板的ELISA测定中,外周孔显色较中心孔深的现象。产生的原因可能是为96 孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度造成的,因此在温育时尽量采用水浴。Р 3.3洗板Р ELISA测定的洗板一般有两种方式,即手工和洗板机洗板。采用手工洗板,孔与孔之间液体易交叉,采用半自动洗板机时,洗液量不足导致洗板不彻底,洗板针堵塞导致抽吸不完全,洗板不畅导致清洗效果差。控制方法:①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1~2次,或适当增加洗板的次数,有资料报道洗板7 次能达到理想的洗涤效果。Р 3.4显色Р 市售ELISA 试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A 和B 两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15~30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但 A、B 液应尽量避免接触金属器械。Р 3.5结果判定
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