后取脑组织固定石蜡包埋切片 HE染色光镜细胞计数、形态学观察数据处理统计学分析得出结论取脑组织固定石蜡包埋切片( 1) 实验分组: 健康昆明小鼠 42 只(山西省肿瘤医院实验动物中心提供) ,雌雄不分, 体重 20± 2 克左右, 随机分为对照组( A组, n=6 )、假手术组( B组, n=6 )、缺血再灌注损伤组( C组, n=6 ) 和再灌注即刻羟考酮干预组( D1 组, n=6 )、再灌注 30min 羟考酮干预组( D2 组, n=6 )、再灌注 1h 羟考酮干预组( D3 组, n=6 ) 和再灌注 1.5h 羟考酮干预组( D4 组, n=6 )。 D 组给予羟考酮 1 g/k g 腹腔注射。( 2) 动物模型制备: 手术在室温 25℃、湿度 50% 的条件下进行。用 0.6% 的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉( 60mg/kg ) ,络合碘消毒,铺单,行颈部正中切口,分离两侧颈总动脉,用 3-0 丝线打活结阻断颈总动脉, 1h 后实现再灌注。缝合切口, 置清洁饲养笼中观察。 A 组既不手术也不给药。 B 组只分离双侧颈总动脉,穿线, 但不结扎。C 组分离双侧颈总动脉, 结扎 1h 后再灌注, 但不给药。 D1、 D2、 D3、 D4 组分别在再灌注即刻、 30min 、 1h和 1.5h 腹腔注射甘露醇 1 g/kg 。各组再灌注 24h 后 0.6% 戊巴比妥钠( 90mg/kg )腹腔注射麻醉,迅速取脑。( 3) 检查指标和方法标本置于 4% 多聚甲醛液中固定 24h 后,取视交叉后的组织,常规石蜡包埋,冠状切片,片厚 5μ m, 苏木精- 伊红染色( HE 染色) ,光镜下在有测微尺显微镜下(× 10) 计数海马 CA1 区 2mm 范围内核完整的存活细胞数(自 CA1 区始点起) ,并观察海马 CA1 区细胞形态变化,并计算变性细胞率。( 4) 统计分析:
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