75μl 上清液按照“操作步骤”进行检测。操作步骤注意: 所有试剂在使用前应该恢复至室温 18~ 25℃; 使用前试剂应在室温条件下至少放置1 小时。 1 、每孔加入 25μ lCSFV 特异性单克隆抗体。此步骤可以用多道加样器(8~ 12道) 操作。 2 、在相应孔中分别加入 75μl 阳性对照、阴性对照,各加 2 孔。注意更换吸头。 3 、在其余孔中分别加入 75μl 制备好的样品,注意更换吸头。轻轻拍打酶标板,使样品混合均匀。 4 、置湿盒中或用胶条密封后室温(18 ~ 25℃) 温育过夜。也可以放置室温温育 4 个小时, 但是这可降低检测灵敏度。 5、甩掉孔中液体, 用洗涤液(1X) 洗涤 5次, 每次洗涤都要将孔注满。将孔中的所有液体倒空, 用力拍打酶标板, 以使所有液体拍出。或者, 每孔加入洗涤液 250 ~ 300 μl 用自动洗板机洗涤 5 次。注意:洗涤酶标板要仔细细心。 6、每孔加入 100 μl 稀释好的辣根过氧化物酶标记物, 在湿盒或密封后置室温温育 1 小时。 7、重复操作步骤 5;每孔加入 100 μl 底物液, 在暗处室温温育 10 分钟。第1 孔加入底物液开始计时。 8 、每孔加入 100 μl 终止液终止反应。加入终止液的顺序与上述加入底物的顺序一致。 9 、在酶标仪上测量样品与对照孔在 450m 处的吸光值,或测量在 450nm 和 620nm 双波长的吸光值( 空气调零)。 10 、计算每个样品和阳性对照孔的矫正吸光值的平均值( 参见“计算方法”)。计算方法首先计算样品和对照孔的 OD 平均值, 在判定结果之前, 所有样品和阳性对照孔的 OD 平均值必须进行矫正,矫正的 OD 值等于样本或阳性对照值减去阴性对照值。矫正 OD= 样本 OD -阴性对照 OD 注意:北京爱德士元亨生物科技有限公司奋进行平均值相 UN 值计算并提供数据汇总的
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