和 RT-PCR 灵敏度高、特异性强。王振全等[57] 在靶基因的上游引物 5′端标记了生物素 Biotin ,提高了杂交特异性和灵敏度。诊断基因芯片由于在每份检测样品中都设置阳性和阴性参照,并通过分子杂交进行确认,有效地克服了 PCR 易被污染的缺点。该法还引进计算机分析软件进行分析、确诊,大大降低了在结果判断过程中的主观因素,使各个实验室得到的结果具有可比性,而且诊断基因芯片检测样本量越大,成本越低;不仅快速、准确、敏感,而且可以同时进行多种病毒的检测, 使其具有高通量、高度平行性和高速性的特点。 4.5 恒温扩增技术核酸扩增技术是生物医学领域病原体确认的常用检测技术。近年新发展起来的核酸等温扩增技术,无论是在实际操作还是仪器要求方面,都比 PCR 技术更为简单方便,它摆脱了对精良设备的依赖,在临床和现场快速诊断中显示了其良好的应用前景。在众多等温扩增技术中,环介导等温扩增目前已在一定范围内得到了应用。环介导等温扩增技术( LAMP ) 是日本学者 Notmomi 等[58] 于2000 年首先报道的一种新的核酸扩增技术。 LAMP 技术采用能特异识别靶序列上 6个位点的 4 条引物及 1 种具有链置换活性的 DNA 聚合酶,在恒温条件(一般为 60 ℃~65 ℃左右)下, 1h内其扩增效率可达到 10 9 ~10 10个数量级。已有报道 Saitou Y等[59] 和 Hayman DT等[60] 通过使用 RT-LAMP 法来检测狂犬病病毒。许丹[61] 等,针对狂犬病病毒基因?型核蛋白保守区设计 4条识别靶序列上 6 个位点的特异性引物, 在链置换聚合酶(Bst 酶) 作用下,60 ℃恒温 1h 内完成扩增。反应特异性强、灵敏度高。 17 份临床样本的检测结果显示在狂犬病病毒的检测中,LAMP 法和传统 PCR 法的敏感性一致,阳性检出率均为 23.5% 。黄元等
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