HIV抗体检测标准操作程序（SOP）

2张Р6.2.4.5. 抗-HIV阴性对照(已灭活)      1瓶(1ml)               11.说明书                      1份Р6.2.4.6. 20×洗涤液                            1瓶(50ml)             12.密封袋、干燥剂      1套Р6.2.5标本要求血清或血浆(可用枸橼酸钠、肝素等作抗凝剂)Р6.2.6仪器要求酶标仪  洗板机  恒温箱  加液器等Р6.2.7检测程序Р6.2.7.1.将各种试剂移到室温(18-25℃)平衡半小时后,取一瓶20×洗涤液,加蒸馏水至1000 ml,混匀后备用。Р6.2.7.2.将酶联板从密封袋中取出,每孔加入1000μl酶标抗体,设一个空白对照孔,两个阳性对照孔,两个阴性对照孔。取阳性对照和阴性对照分别充分混匀后各20μl  加入对照孔中,其余每个孔加待检血清20μl,充分混匀,将酶联反应板置微板振荡器上混合5-10秒,用不干胶封片封盖反应板。未用完的板条在密封袋中保存。Р6.2.7.3.酶联板置37℃温育60分钟, 小心吸干孔中血清,用洗涤液洗5次,然后在吸水纸上拍干。Р6.2.7.4.每孔加显色剂A  50μl ,显色剂B  50μl ,轻轻振荡后置37℃暗处显色30分钟,每孔加终止液50μl。Р6.2.7.5.选择酶标仪测定波长450nm,用空白孔调零点,测定各孔OD值。也可选择630 nm作为参考波长,用双波长测定。Р6.2.8结果判定Р6.2.8.1.Cutoff值=0.12+N(阴性对照的平均值)Р6.2.8.2.阴性对照OD值大于等于0.10。Р6.2.8.3.阳性对照OD值大于等于0.80,阴性对照OD值大于0.1,则实验不成立,全部实验重做。Р6.2.8.4.标本OD值小于Cutoff值为阴性,大于等于Cutoff值为阳性。