光吸收的基本定律РРР入射光РI0РРIР透射光Рlight detectorРРР根据Lambert- Beer定律来计算待测物浓度?如若吸光系数 (ε )未知,我们就需要采用定标曲线来计算待测物的浓度。РConcx =Δ Absx x Concs?? Abss?Concx ?= 待测样本浓度?Concs ?= 标准品浓度?Δ Absx = 样本吸光度?Abss ?= 标准品吸光度РРР此值为定值Р浓度 (amount of substance)Р吸光度 (amount of color)Р40РРРРРРРРРРРРРРРР1?2?3?4?5?6Р70Р60Р50Р30Р20Р10РРРРРРРРР——分光光度法定量分析的依据РLambert-Beer 定律适合于任何均匀非散射的介质РР生化比色分析РР特定蛋白透射比浊分析РР当相应的比色杯每一次通过光路系统时,光路系统会测量并记录下相应的吸光度?光路系统可以测量后分光后12个波长的相应吸光度。?12 有效波长: 340, 376, 415, 450, 480, 505, 546, 570, 600, 660, 700, 800nm ?多数检测项目都使用双波长检测方法。(可去除干扰物对检测结果的影响)РРР仪器读数原理Р反应转盘不停的周期旋转Р当相应的比色杯通过光路系统时,光路系统会测量并记录下相应的吸光度Р在不同的时间点加入相应的反应试剂РР1РР终点法Р2РР速率法Р全自动生化分析仪常用的方法РР(一)终点法(end assay)Р被测物质在反应过程中完全被转变为产物,到达反应终点,根据终点吸光度的大小求出被测物浓度,称为终点法。?该法称为平衡法更为恰当。从时间-吸光度曲线来看,到达反应终点或平衡点时,吸光度将不再变化。终点法参数设置简单,反应时间一般较长,精密度较好。