流式细胞术的应用课件

G2期:DNA合成结束4CM期:有丝分裂4C正常细胞DNA含量稳定在2C水平性细胞DNA含量为1C凋亡细胞DNA断裂,DNA含量<2C增殖期的细胞DNA含量由2C增加至4C流式细胞术应用于细胞周期检测检测原理:利用特殊的荧光染料与细胞内DNA碱基结合,被这些荧光染料标记上的细胞在激光照射下发射出荧光,荧光强度与DNA含量成正比。流式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推算出细胞的DNA含量。区分细胞周期的G0/1期,S期和G2/M期。核酸荧光染料染料名称激光器激发波长特点PI488nm535nm细胞膜非通透性,应用最广泛7-ADD488nm545nm细胞膜非透性,发射波长集中,代替PIDAPI375nm355nm358nm细胞膜透性,稳定,CV值最小,需要紫外激光激发Hoechst33342375nm355nm346nm细胞膜透性,活细胞标记,需紫外激光激发Hoechst33258355nm346nm细胞膜透性,活细胞标记,需紫外激光激发AO488nm460(RNA)480(DNA)细胞膜非透性,可区分G0期,G1期,S期,G2期和M期DRAQ5640nm640nm细胞膜透性,具有细胞毒性细胞膜非通透性染料:PI、EB,不能进入完整细胞膜,标记时需要通过固定等方法增加细胞膜的通透性。细胞膜通透性染料:DAPI、Hoechst,能染活细胞的DNA,但需紫外激光激发。PI标记法荧光染料特征:PI=PropidiumIodide碘化丙啶核酸染料,激发波长:488nm,发射波长:>630nm特点:非细胞膜透性,需要乙醇固定增加细胞膜的通透性;检测原理:与双链DNA和RNA结合,可产生荧光.,需要加RNase,去除RNA对DNA的干扰。荧光强度和双链DNA的含量成正比用流式细胞仪根据荧光强度对细胞进行DNA含量测定然后根据DNA含量的分布情况,可进行细胞周期分析样品制备:乙醇固定法PI标记法