噬菌体抗体库技术

抗体库,另一类为非免疫抗体库。Р免疫抗体库的抗体基因来源于抗原免疫的个体,因此不需要很大的库容量即可从该类抗体库中筛选到针对某一抗原的特异性抗体。但由于免疫本身的限制性和偏向性,利用免疫抗体库制备针对弱抗原自身抗原及具有毒性抗原的抗体均无效,而且某一特定的抗体库只能产生针对特定抗原的抗体,不能作为一个广泛应用的平台。Р1.2 噬菌体抗体库的分类Р构建这种抗体库的原始材料是种系的VH和/或VL基因片段或者是重排的可变区片段,在这里,一个或多个CDR要进行随机重排。在人类的重链片段中,第一和第二个CDR是由种系编码的,基本上是具有规范结构的。而CDR3是通过D区和J区组合而成的,具有高度的多样性,长度可以从2个氨基酸到26个氨基酸不等,是抗体多样性和特异性的决定因素。因而,半合成抗体库是指用人工合成长度为5~8或6一巧个氨基酸的CDR3随机序列与人胚系可变区基因(含CDRI和CDRZ)重组而成,在体外模拟V(D)J重排所构建的抗体库。Р半合成抗体库Р(1)PCR技术的发展Р为了大量扩增抗体基因片段,可设计一系列相应引物,根据抗体中某些序列的相对保守性,利用不同的PCR技术简单有效地扩增出全套抗体可变区基因。一旦多样的IgV区基因组能够扩增,从噬菌体抗体库中即能得到针对不同抗原的高亲和力抗体。Р1.3 噬菌体抗体库技术的发展关键Р(2)利用大肠埃希菌成功分泌有功能的抗体片段?在抗体片段如ScFv和Fab的可变区基因序列的5‘端加入细菌的信号肽序列,抗体片段即可分泌到周质腔,并在那里完成折叠,成为有功能的蛋白质分子。Р(3)有效筛选系统的建立?传统的筛选方法使用固相化的纯化抗原,依赖噬菌体颗粒对目的抗原的亲和力差异来获得较高亲和力的抗体。而目前,可以在体外用完整的固化哺乳动物细胞原核细胞和组织中的天然抗原筛选噬菌体抗体片段。Р1.3 噬菌体抗体库技术的发展关键Р2. 噬菌体展示系统