R I的切割位点Р回文结构:两条核苷酸链的核酸序列呈双重旋转对称排列的 DNA双螺旋结构Р三、Ⅱ型限制酶的特性-切割后形成的末端Р粘性末端:Р5‘… GTGAATTCGA … 3’?3‘… CACTTAAGCT … 5’РEcoR IР5‘… GTG AATTCGA … 3’?3‘… CACTTAA GCT … 5’Р平齐末端:Р5‘… GAG … 3’?3‘… GGCTC … 5’Р5‘… GAG … 3’?3‘… GGCTC … 5’РHaeⅢР彼此具有互补核苷酸的单链延伸末端Р三、Ⅱ型限制酶的特性-同尾酶、同裂酶Р同尾酶:来源各异、识别序列也不相同,但都产生相同粘性末端的一类限制酶Р5‘… GA … 3’?3‘… TAGGCT … 5’РBamH IР5‘… GTG GA … 3’?3‘… TAG GCT … 5’Р5‘… GTTGATCAGA … 3’?3‘… CAACTAGTCT … 5’РBcl IР5‘… GTT GATCAGA … 3’?3‘… CAACTAG TCT … 5’РBamHI、 BclI为一组同尾酶Р同裂酶:来源各异,但识别相同核酸序列的一类酶Р5‘… GTGATCGA … 3’?3‘… CACTAGCT … 5’РSau3A IР5‘… A … 3’?3‘… CTCTAGGT … 5’РMboIР5‘… GGGGA … 3’?3‘… T … 5’РXmaIР5‘… GGGGA … 3’?3‘… T … 5’РSmaIР四、影响限制酶活性的因素РDNA的纯度:Р蛋白质、苯酚、氯仿、EDTA、SDSР增加限制酶用量?扩大酶催化反应体系?延长酶催化时间РDNA的甲基化程度:Р反应温度:РDNA的分子结构:Р酶缓冲液组成:Р甘油浓度:РMgCl2:?NaCl/KCl:?Tris-HCl:?β-巯基乙醇/二硫苏糖醇(DTT):?牛血清白蛋白(BSA):
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