第一节 根癌农杆菌Ti质粒

2等Р土壤农杆菌与植物细胞相互作用的可能性机制Р酚类物质РVIR AР由此可见,农杆菌对植物的侵染作用,就是一种天然发生的基因工程。Р一、Ti质粒的改造?(一)Ti质粒?1.定义? 是根癌农杆菌染色体外的遗传物质,为双股共价闭合的环状DNA大分子,其大小为180-240 kb。?2.种类? 2.1 根据冠瘿碱的种类不同? 章鱼碱型(octopine); 胭脂碱型(nopaline);农杆碱型(agropine)?和农杆菌素碱型(agrocinopine) or琥珀碱型(inamopine)Р第一节根癌农杆菌Ti质粒基因转化载体的构建Р第一节根癌农杆菌Ti质粒基因转化载体的构建Р(一) Ti质粒?2.种类? 2.2 根据功能区段不同? 基因转移T-DNA区(transferred DNA region):? 与基因转移相关? 毒性区,即Vir区(Virulence region,Vir):? 激活T-DNA转移,使农杆菌对植物表现出侵染性的毒性区? 接合转移区(region encoding conjuation,Con)? 调控Ti质粒在农杆菌间发生接合转移? 自我复制区(origin of replication,Ori)? 调控Ti质粒自我复制Р第一节根癌农杆菌Ti质粒基因转化载体的构建Р(二)天然Ti质粒存在的缺点?1.缺点? ⑴野生型Ti质粒分子十分巨大;? 野生型Ti质粒分子一般都为180-240 kb,几乎无法进行基因工程的操作,所以应去除一切不必要的大片段DNA。? ⑵限制性内切核酸酶位点众多;? Ti质粒是分布着各种限制性内切核酸酶,难以找到可利用的单一限制性内切核酸酶位,因此很难通过体外DNA重组技术直接向野生型Ti质粒导入外源基因.? ⑶ T-DNA区段内含有许多编码基因;? 植物生长素合成酶基因,细胞分裂素合成有关酶基因等.? ⑷在大肠杆菌中不能复制。