酶联免疫吸附试验РEnzye-linked immunosorben assay?ELISAР教学要求Р掌握酶联免疫吸附试验的基本方法及其原理。?学习双抗夹心ELISA检测的基本操作。Р抗原:进入人或动物机体后,可刺激机体免疫系统发生免疫应答,从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞,并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。?抗体:是由抗原刺激动物的免疫系统后,由免疫系统产生分泌的能和相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。?抗原抗体反应的基本特性:a、反应的特异性;b、反应的等比例性Р实验原理РELISA是以抗原抗体反应为基础,ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定,这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来,使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。Р用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。目前应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用最广。Р常用ELISA方法Р直接法?间接法测定抗体?双抗体夹心法测定抗原?竞争法测定抗原Р待检抗原Р固相载体Р酶标抗体Р酶作用底物Р包被Р直接法检测抗原Р间接法Р将酶标记在二抗上,当抗体(一抗)和包被在酶标板的抗原结合形成复合后,再以酶标二抗和复合物结合,通过测定酶反应产物的颜色可以(间接)反映一抗和抗原的结合情况。Р抗原包被Р加入待检抗体Р加入酶标抗体Р加入酶作用底物Р间接法测抗体
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