分子克隆技术

idРligationРChemeric plasmidРForeign DNA fragmentР重组DNA分子Р载体是指能携带外源DNA片段进行自我复制的DNA分子。例如,细菌的质粒。Р质粒是细菌染色体外能独立复制的双链环状DNA分子。Р二、基因克隆的基本程序РTarget DNA fragmentРRE digestionРPlasmidРRE digestionРLigationРbinant plasmidРTarget DNA fragmentРTransformationРE.Coli without vector dieРE.Coli with vector growРCulture in the medium containing antibioticРTarget DNA fragmentРRestriction enzymeРPlasmidРRestriction enzymeРT4 ligaseРbinant plasmidРTarget DNA fragmentРPCRРTaq DNA PolРRT-PCRРRTaseР基因克隆需要一些工具酶。Р三、基因克隆中的工具酶Р常用的工具酶:?限制性内切酶(restriction endonuclease, RE)?DNA连接酶(DNA ligase) ?DNA聚合酶(DNA polymerase, DNA pol.)?末端转移酶(Terminal transferase)?碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase)Р(一)限制性内切酶Р限制性内切酶(Restriction Endonuclease, RE)是一类能识别和切割双链DNA分子内特定碱基顺序的核酸水解酶。?分三型:?I型限制性内切酶(兼修饰功能,没有固定切点)?II型限制性内切酶(分子生物学常用)?III型限制性内切酶(兼修饰功能)