分子克隆

酶Р催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸二酯键,使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接РDNA聚合酶ⅠР合成双链cDNA分子或片段连接?缺口平移制作高比活探针?DNA序列分析?填补3´末端РKlenow片段Р又名DNA聚合酶I大片段,具有完整DNA聚合酶I的53聚合、35外切活性,而无53外切活性。常用于cDNA第二链合成,双链DNA 3末端标记等Р反转录酶Р合成cDNA?替代DNA聚合酶I进行填补,标记或DNA序列分析Р多聚核苷酸激酶Р催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化,或标记探针Р末端转移酶Р在3´羟基末端进行同质多聚物加尾Р碱性磷酸酶Р切除末端磷酸基Р第二节分子克隆常用的工具酶Р7Р一、限制性内切酶?? ○酶有几千种,分为6大类:氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、连接酶。а○基因工程中常用作用于核酸的酶,包括水解酶、修饰酶、聚合酶等? 水解酶分为内切酶和外切酶?? ○内切酶在核酸链内部切割,生成寡核苷酸;外切酶从核酸链的末端开始,渐进式地水解核酸链,逐渐释放单核苷酸。Р第二节分子克隆常用的工具酶Р8Р有特定的识别序列Р但切割位置远离识别位置Р有的种类可以在同识别序列相距1000bp的位置上随机切割DNA分子Р在基因工程中没有什么用途РⅠ型限制酶Р第二节分子克隆常用的工具酶Р9РⅢ型限制酶Р有特定的识别序列Р切割位置在识别序列3’端相距20bp处,可以产生各种类型的单链末端。РⅢ型限制酶在基因工程中有特定的用途,但总体来说,用途不大。Р第二节分子克隆常用的工具酶Р10РⅡ型限制酶Р在DNA上有特定的识别序列Р而且其切割位点就在识别序列内部Р基因工程中用途最广Р识别序列是对称的,在一条链中从5’到3’方向的序列与其互补链从5’到3’方向的序列完全相同,称为回纹对称序列(palindrome)。Р第二节分子克隆常用的工具酶