于免疫印迹、免疫渗滤、免疫层析试验。? 金标记免疫层析是利用NC膜条状纤维的毛细管作用,是样品在泳动中与金标记物及包被在NC膜上的抗原或抗体结合,出现呈色的阳性信号。Р酶免疫技术Р酶和酶作用的底物:?1.辣根过氧化物酶(HRP),常用底物为邻苯二胺(OPD),四甲基联苯胺(TMB)和ABTS。?2.碱性磷酸酶(AP),多采用对硝基苯磷酸酯为底物。?3.其他的酶:有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。Р酶联免疫吸附试验Р★原理:酶联免疫吸附技术是免疫酶技术中固相酶免疫测定的一种技术。基本原理是将待测抗原或抗体先固定于固相载体表面,再用酶标记的抗原或抗体与已被固定的相应抗体或抗原发生特异性反应,加入酶底物及色原后呈色,呈色程度用吸光度(A)值表示,所测A值与待测抗体或抗原的水平呈相关关系。Р酶联免疫吸附试验Р1.间接法:用于检测样本中特异性抗体?将已知特异性抗原包被于聚苯乙烯板微孔,形成固相抗原;洗弃未结合的抗原;加待检样本,若其中含有特异性抗体则与固相抗原结合形成抗原-抗体复合物;洗弃未反应的部分,加酶标记抗抗体(一般为标记抗人IgG或葡萄球菌A蛋白),使在固相载体上形成抗原-待检抗体-标记抗体复合物;洗弃未反应的部分,加入酶底物及色原呈色,在一定波长下测吸光度(A)值判定待测抗体的有无和水平。Р酶联免疫吸附试验Р3.双抗体或双抗原夹心法:?双抗体夹心法:用于检测相对分子质量较大的蛋白质抗原?先将已知特异性抗体包被于固相载体上,加待测样本,若其中有相应的抗原则与固相抗体特异性结合;洗板后加入酶标记特异性抗体,使在固相载体上形成包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物;洗板;加酶底物及色原呈色。抗原或抗体水平与所测吸光度(A)值呈正相关。?双抗原夹心法:用包被抗原和酶标记抗原检测样本中的特异性抗体。Р酶联免疫吸附试验Р4.捕获法?5.生物素与亲和素ELISA(ABC-ELISA)
全文预览
