手术标本,以及其它不能进行灌注的组织固定。灌注法适用于动物实验研究。用于组织固定的固定剂种类很多,包括醛类、非醛类、丙酮及醇类等,其中以中性缓冲液配制多种聚甲醛较为常用2’,- 3组织固定时,一方面固定液要有足够的量,另一方面还要保持一定时间,一般在快速灌注固定取材后,多用相同的固定剂再固定! % " ,以使组织充分固定,这对保持切片的完整性尤为重要。Р减少冰晶的形成Р未经固定的组织切片时冰晶较多,这是公认的事实,即使固定后的组织切片仍然会有一定的冰晶,为防止冰晶的形成,常可采取如下方法: 1.速冻法:将组织置入低温环境,使组织骤然降温。2.利用高渗溶液吸收组织分子:将组织置于20% ——30%的蔗糖溶液中, 置4摄氏度冰箱足够时间,观察组织快,待其沉底后,取出切片。这样即可大大减少冰晶的形成。Р保持切片的完整性Р破碎的组织切片必然丢失实验信息,切片的完整性对研究结果的分析无疑十分重要。切片破碎不全、有缺损的常见原因有: 1组织固定不完全; 2温度设置不当。组织块过冷、过硬,则切片就容易破碎。组织块冷冻不够,硬度和韧度达不到,切片也同样易粘、易碎;3组织块带有皮肤、包膜、过大或冰晶过多;4 切片刀钝或较脏,切片出现刮痕,使切片不完整;5操作手法不当,如速度不适宜,切片也可能不完整。遇到上述情况,应有针对性的采取相应的措施。如注意组织固定充分、尽量减少冰晶的形成,保持刀片的清洁与锋利,冷冻温度要适宜,不同的组织应设置不同的温度,如较大组织块或含有较多脂肪的组织应设置温度相对较低,冷冻时间稍长些。而脑、脊髓等温度设置相对高些有作者采用“边冻边切”法制作切片,同样也取得较好的效果。若组织带有不必要的皮肤或包膜,应尽量去除干净;如必须保留皮肤或包膜,应注意采取相应的切片技术,如最好将皮肤或包膜的平面与刀面垂直。此外,在切片时,应注意速度均匀。当然,要做好这些,必须有一定的实践经验。
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