皮肤科免疫荧光技术 PPT课件

皮肤科免疫荧光技术Р河北医科大学第二医院皮肤科?郭兵申Р免疫荧光技术概述Р原理? 将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。?分类?直接法:将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。?间接法:将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应,形成抗原-抗体-抗抗体复合物体系,进检测的一种特异性荧光反应。Р免疫荧光原理示意图Р临床常用荧光素染料Р⑴异硫氰酸荧光素(FITC)?λ吸=490--495nm 、λ发=520--530nm、黄绿色荧光Р⑵四乙基罗丹明(RIB200)?λ吸=570nm、λ发=595~600nm、呈橘红色荧光Р⑶四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)?λ吸=550nm、λ发=620nm、呈橙红色荧光Р皮肤直接免疫荧光检测Р适应症:?非感染性大疱性皮肤病?天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等?结绨组织病:如红斑狼疮等?各种血管炎?皮肤肿瘤?某些感染性皮肤病Р皮肤间接免疫荧光检测Р适应症:?血清中各种抗微生物抗体测定?如:梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等?血清中各种自身抗体的测定?系统性疾病:如红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病等?大疱性皮肤病:如天疱疮抗体等?糖尿病:如抗胰岛细胞抗体等Р操作方法及流程Р冰冻切片、染色、镜检Р组织修材,成适合冰冻包埋块的大小Р冰冻切片Р抗原与荧光抗体结合Р荧光显微镜下镜检及成像,打印报告Р操作方法及流程Р间接免疫荧光染色步骤Р操作方法及流程