荧光免疫技术抗核抗体ANA检测间接免疫荧光法

nulear antibody)定义Р传统定义:是指抗细胞核抗原成分的自身抗体? 狭义定义Р现代定义:是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体? 对ANA的理解已不再局限于核成分,而是指一类抗核酸和核蛋白等细胞成分抗体的总称? 广义定义Р抗核抗体的定义Р1РANA细胞靶抗原成份模式图Р真核细胞Р高尔基体Р分泌颗粒Р粗面内质网Р核仁Р核粒子Р糖原颗粒Р溶酶体Р细胞骨架蛋白Р细胞膜Р线粒体Р滑面内质网Р中心粒Р推荐采用以HEp-2细胞(Human Epithelial Cells,人喉癌上皮细胞株)为底物的间接免疫荧光法(Indirect ImmunoFluorescence assays, IIF)Р优点:① HEp-2细胞形态大,细胞抗原种类齐全,分裂期成份(如着丝点、纺缍体、中心粒)等丰富(抗原齐全)Р②IIF法可直接观察针对细胞成份的抗体(形态直观)Р抗核抗体的检测Р2Р试剂与器材Р ANA检测试剂盒?包被组织切片的生物薄片(Hep2细胞、猴肝片)?PH7.2 磷酸盐缓冲液/吐温20?标记FITC羊抗人二抗?阴性、阳性质控?石蜡(封片介质,PH8.4)?加样枪,试管,洗片槽,荧光显微镜Р⑥荧光显微镜观察Р① HEp-2细胞(底物片试剂盒)Р②加入标本反应Р④加入荧光二抗反应Р③洗去未反应血清蛋白РFРFРFРFРFР⑤洗去多余荧光二抗Р自身抗体Р非特异蛋白РANA检测原理和步骤Р检测过程: 2 步反应+ 2步洗涤+ 1步观察Р包被组织切片的生物薄片Р加样板Р加25ul待测样本后盖板,避免产生气泡Р洗涤(先冲洗后浸泡)РPBS-Tween20Р擦干生物薄片四周洗液Р待测血清稀释100倍?20ul血清+2mlPBS稀释液Р室温温育30分钟Р浸洗至少5分钟Р操作步骤Р生物薄片编号,如1,2,3Р实验报告注明所加样本号?(如1-1,5051;1-2,5047)Р阴阳质控不稀释