(%) 全因死亡率归因死亡率(曲霉)时间(周)二GM的检测原理 ELISA 方法简介?酶联免疫吸附测定技术(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA) 是以抗原、抗体的特异性结合反应为基础,将抗原或抗体的检测与酶对底物的高效催化作用结合起来的一种敏感性很高的免疫检测技术。?曲霉菌抗原检测采用了间接竞争法。?ELISA 试验操作过程由样本处理、加样、孵育、洗涤、显色、终止等几个基本环节组成。(一)GM的检测原理检测物质?本实验检测曲霉菌中的半乳甘露聚糖。?半乳甘露聚糖( Galactomannan ,简写 GM )是曲霉菌细胞壁上特有的成分,当菌丝生长时,半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放,是最早释放的抗原。?当曲霉在深部组织中生长时, 半乳甘露聚糖可释放入血液,因此检测病人血液或者是体液中的半乳糖甘露聚糖可以作为早期诊断感染的方法。(一)GM的检测原理实验原理?本实验使用特异抗体检测曲霉菌半乳甘露聚糖抗原。其原理是标本中的抗原和包被的固相抗原均与试剂中抗体竞争结合。标本中抗原量含量愈多,与试剂中抗体结合越多,结合到固相上的酶标抗体愈少, 最后的显色也愈浅。?标本和试剂反应后所产生的颜色变化( OD 值)与标本中待测定的 GM含量成反比关系。?通过标准曲线,便可以通过反应显色的 OD 值计算出待测标本中 GM的含量。(一)GM的检测原理三实验操作流程 GM实验所需的仪器及耗材 1. 酶标仪:必须能使用 450nm 波长用于检测。 2. 高速离心机:必须达到 10000g 离心力以上,最好是低温离心机。 3. 37 ℃恒温培养箱(或其他可替代的恒温空气浴设备)必须设置温度为 37℃,其他温度(如 35℃)不可以使用,否则会影响检测值,同时要保证恒温箱的洁净。 4. 沸水浴:一般的电磁炉或者其他可以保证沸水浴的设备皆可,但暂不推荐干浴
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