才清楚。Stokes在1852年详细考察了奎宁和叶绿素的荧光后发现,他们的荧光波长比照射光波长要长,认定是物质吸收光后重新发射出的光,并且波长不同,荧光是发射光被证实。根据“荧石”能发出这种光,提出了“荧光”的概念。5?1.3荧光产生的原理?分子中具有不同的能级,电子处于不同的能级中。通常情况下分子的电子处于最低的能级状态,即基态用S0表示。当光照射到分子上,电子被激发,从低能级跃迁到高能级即激发态,用S1, S2……表示。高能级的电子不稳定,通过辐射跃迁和非辐射跃迁失去能量返回基态,而荧光就是激发态的分子和原子返回基态过程中放射出来的一种光能。若被光照射激发的是分子,发出的是分子荧光。如图1所示。6S2图1.分子吸光与发光示意图?Ee振动能级v3v2v1转动r3r2r1S1S0 紫外荧光磷光T2T1可见?Ev?Er红外单重态三重态系间窜跃7二、荧光分析法的测定及其特点?1.分子荧光分析法:?不同物质激发光谱和荧光发射光谱不同——定性分析的基础?同一物质,其它条件相同而浓度不同时,其荧光强度不同——定量分析的基础81.1激发光谱和荧光发射光谱?激发光谱:固定荧光发射波长和狭缝宽度扫描,得到荧光激发波长和相应荧光强度关系的曲线即荧光激发光谱。?发射光谱:固定荧光激发波长和狭缝宽度扫描,得到荧光发射波长和相应荧光强度关系的曲线即荧光发射光谱。?(由于在测定过程中仪器及其构件等因素的影响,同一物质的荧光激发光谱和荧光发射光谱均有不同程度的差别)91.2荧光强度与物质浓度的关系:?荧光强度:在一定条件下仪器所测得荧光物质发射荧光大小的一种量度。其中c为物质浓度。F=2.3ΦFI0εbc10?在荧光物质浓度较小的情况下,产生的荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比。当浓度增大到一定程度,荧光强度常随浓度的增加而下降。因此荧光分析法用于微量与痕量组分的测定,而不适于常量和大量组分的分析。
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