不溶于水的固态酶,可以较长时间使用。二酶的提取(一)预处理①胞外酶:将液体培养液过滤或离心除去菌体,所得的清夜即粗酶液。如果是固态发酵,用水或缓冲液浸泡,在离心或过滤除去菌体和杂质后得到粗酶液。②胞内酶:破碎细胞壁和质膜,制成无细胞提取液。(二)酶的提取由于不同的酶的等电点、pH、温度稳定性等性质不同,提取方法也不同。1 水溶液提取法2 表面活性剂提取法3 丁醇提取法(一)浓缩葡聚糖凝胶—分子筛浓缩法、聚乙二糖浓缩法、超滤膜浓缩法、盐析或乙醇沉淀后分离。(二)去杂质pH沉淀法、利用蛋白质热变性的温度差异、蛋白沉淀剂法。(三)纯化盐析法、有机溶剂沉淀法、层析法。(四)结晶当酶达到一定纯度后,在适当的温度下、pH下,逐渐加入(NH4)2SO4溶液,酶可以慢慢析出结晶,也可以加入某些有机溶剂析出结晶。三酶的纯化1.固定化酶:从筛选、培育获得的优良菌体中提取活性极高的酶,再用包埋法(或交联法、载体结合法、逆胶束酶反应系统)等方法将酶固定在载体上,制成不溶于水的固态酶,即固定化酶。2.固定化微生物:用固定酶的方法将酶活力强的微生物固定在载体上,即成固定化微生物。微生物本身是多酶体系的固定化载体,将整个细胞固定化更有利于保持原有活性。有死细胞固定化和生长细胞固定化两种。3.固定化酶和固定化微生物特性:性能稳定、降解有机物性能强、耐毒、抗杂菌、耐冲击负荷。四固定化酶和固定化微生物水溶性酶水不溶性载体水不溶性(固定化酶)固定化技术载体结合交联法包埋法逆胶束酶固定化酶固定化技术Ⅰ载体结合法: 以共价结合、离子结合和物理吸附等将酶固定在非水溶性载体上。载体有葡聚糖、活性炭、胶原、琼脂糖、多孔玻璃珠、高岭土、硅胶、氧化铝、羧甲基纤维素等。不溶性载体酶载体结合法交联法:将酶与两个以上的官能团的试剂反应形成共价键的固定方法。交联剂有:戊二醛、双重氮联苯胺和六甲撑二异氰酸酯。交联法固定化技术Ⅱ
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