度一般为Tm-5度。Р整理课件РР二、PCR技术的原理Р3. 延伸 (Extension): ? 在适宜温度下，在DNA聚合酶作用下，以4种 dNTPs等为 原料，从引物的 3′ 端开始，结合单核苷酸，形成与模板链互补的新DNA链的过程。 耐热DNA聚合酶最适温度为72 ℃。? ?? 上述 3 步为一个循环，每经过一个循环，样本中的DNA量就增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过35个循环后，理论上DNA的量可达到235倍。Р整理课件РРPCR 的基本反应步骤Р变性?95˚CР延伸?72˚CР退火?Tm-5˚CР整理课件РРРРРРPCR的指数扩增（2n）Р引物РРРРРРР5’Р5’Р3’Р3’Р第一次循环Р第二次循环РР第n次循环Р二、PCR技术的原理Р整理课件РР1. 缓冲液：? 10 ～ 50 mM Tris- Cl (pH8.4)： 维持 Taq 酶作用环境的偏碱性? 25 ～ 50 mM KCl： 促进引物退火，>50 mM 会抑制 Taq 酶的活性。? 100μg / ml 牛血清白蛋白 (BSA)： 对酶有一定的保护性，如质量不好将起相反的作 用，建议使用乙酰化的 BSA。明胶、Tween-20、 二硫苏糖醇 (DTT) 也有类似作用。Р三、PCR反应体系的的成分及其作用Р整理课件РР2. MgCl2 ： Taq 酶具有 Mg2+依赖性，显著影响反应的特异性和扩增片段的产量，浓度一般为1.5 ～ 2.0 mM，浓度过高能增加非特异扩增并影响产率，过低则酶活性显著下降。?? 3. dNTPs : dATP、 dGTP 、dCTP、dTTP。浓度一般为0.05 ～ 0.2 mM。 过高能加快反应速度，但可增加碱基的错误掺入 率和室验成本。 过低则反应速度下降，但可提高实验的精确性。Р三、PCR反应体系的的成分及其作用Р整理课件
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