及LPL启动子报告质粒共转染HepG2细胞。结果显示,干扰NF.YA表达不影响ZHX2对LPL启动子的抑制作用,提示NF—YA不参与ZHX2介导的LPL启动予活性调控。 4.EMSA及ChIP实验显示ZHX2能与LPL启动子Octamer位点结合为研究ZHX2与LPL启动子能否结合,将pcDNA3.0.ZHX2.HA转染 HepG2细胞,提取核蛋白,进行染色质免疫共沉淀实验(Chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)。对HA抗体免疫沉淀后的DNA进行PCR扩增,结果显示,ZHX2能够与含有Octamer的LPL启动子.96~+67片段结合,但不能与不含有Octamer的.177—.67片段结合。为进一步研究ZHX2与Octamer的结合,分别用pcDNA3.0及pcDNA3.0- ZHX2.HA转染HEK293细胞,提取胞核蛋白。根据LPL启动子序列设计合成 Octamer探针,凝胶阻滞实验(Electrophoretic Mobility ShiftAssay,EMSA)29果显示,含ZHX2的核蛋白能与标记探针很好的结合,该结合能被未标记探针竞争性抑制,加入HA抗体的super shift实验进一步验证j,ZHX2蛋白能与 Octamer序列的特异性结合。 5.Co.IP实验显示ZHX2可以与转录因子Oct.1结合 ZHX2含有与蛋白相互作用的HDl功能域。为研究ZHX2能否跟与 Octamer结合的转录因子Oct.1结合,用pcDNA3.0.ZHX2.HA转染HepG2细胞后,提取细胞总蛋白,进行免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)实验。结果显示,IP抗体ZHX2杂交的蛋白能够与Oct.1结合,说明ZHX2能够与转录因子 0ct一1相互结合。三、ZHX2通过抑制LPL减轻肝癌细胞系及小鼠肝脏的脂肪变万方数据
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