富血小板血浆和IGF1对人脂肪来源干细胞体外成脂分化的影响和比较

部分富血小板血浆(PRP)和胰岛素样生长因子1(IGF-1) 对人ADSCs体外成脂分化的影响及比较。目的:探讨人富血小板血浆(PRP)的分离提取方法,观察PRP及IGF-1对体外培养人脂肪来源干细胞成脂分化的影响,观察两者对ADSCs成脂分化的作用差异,并初步探讨作用机制,为PRP应用于临床脂肪移植提供实验依据。方法: 1.用血常规检验管抽取每位志愿者30ml全血,混合均匀置于冰上。用2次离心法获取PRP。至检验科检验全血及PRP血小板含量。2.用IGF-1及二次离心法提取的人PRP对人ADSCs进行培养,实验分为对照组、PRP组、IGF-1组,每组三个复孔。各组成脂诱导9天后,进行油红O染色,甘油封片,正置相差显微镜400倍下拍照,每张片子随机5个视野。用IPP软件对各组脂滴个数、面积等进行分析比较。3.RT-PCR检测成脂诱导过程中PPAR-gamma表达量,分组为对照组、PRP组、IGF-1组。按照分组条件进行成脂诱导,4d后结束诱导,提取各组总RNA,逆转录为cDNA,再通过PCR进行扩增,电泳后,在紫外灯下观察比较目的基因条带。拍照后,用Image-J软件分析比较条带灰度值。结果:通过二次离心的方法提取PRP,每30ml血液可获得PRP 4ml,检验得PRP中血小板的含量为全血的8倍。成脂诱导9天后进行油红O染色,分析脂滴个数及面积发现,对照组脂滴个数及面积明显小于两实验组,而PRP组的各分析指标小于 IGF-1组。RT-PCR结果显示:IGF-1组PPAR-gamma表达量最多,其次为PRP 组,其次为对照组。结论:二次离心法可以获得有效稳定且血小板含量较高的 PRP。PRP及IGF-1对人ADSCs的成脂分化均有较强的促进作用,而IGF-1对其作用强于PRP。关键词:富血小板血浆;IGF-1;油红O染色;RT-PCR;PPAR-gamma;二次离心法万方数据