响检验结果的改变时,应进行LAL试剂灵敏度复核试验。在每支试管中,分别混合等体积(如0.1mL)的LAL试剂和标准溶液。如使用的是装有LAL试剂冻干粉末的西林瓶或安瓿,可向其中直接加入溶液。按照LAL生产厂家的说明,保温装有反应试剂混合物的试管(通常在37±1℃下保存60±2分钟),在此过程中,不能震动试管。保温结束后,为测试凝胶的完整性,缓缓将每个容器倒转1800。如果形成了坚实的凝胶,倒转后凝胶不移位,此时将该项检查的结果记录为阳性。如未能形成凝胶,或形成的凝胶不坚实、在倒转过程中出现了滑脱,该项检查的结果即为阴性。仅在最低浓度的标准溶液的所有平行管的检查结果均为阴性的情况下,方可判定试验有效。反应终点浓度指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。使用下面的公式,计算终点浓度的几何平均值:终点浓度的几何平均值=lg-1(Σe/f)Σe为所用系列溶液的终点浓度的对数值的和;f为平行管的数量。反应终点的几何平均值即为LAL试剂的标示灵敏度(单位为EU/mL)。当终点浓度的几何平均值在0.5λ至2.0λ之间,可判定受试LAL试剂的标示灵敏度为λ。凝胶法的干扰因素试验——按表1制备溶液A、B、C、D,使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过MVD的溶液,按LAL试剂灵敏度复核试验项下操作。用检查法给出的公式计算溶液B、C的反应终点的几何平均值。表1凝胶法的阻抑/增强试验溶液的制备溶液内毒素浓度/配制内毒素的溶液稀释剂稀释倍数稀释后内毒素的浓度平行管数A无/供试品溶液---4B2λ/供试品溶液供试品溶液12482λ1λ0.5λ0.25λ4444C2λ/LAL试剂用水LAL试剂用水12482λ1λ0.5λ0.25λ2222D无/BET检查用水---2溶液A:去除内毒素的供试品溶液溶液B:干扰试验溶液溶液C:LAL试剂标示灵敏度的对照品溶液D:LAL试剂用水制成的阴性对照品
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