,吸取稀释液2.00ml于洁净离心管中,加入2.00ml钨酸溶液,混匀,室温静置,直至溶液中出现明显絮状物(约30~45min),10000r/m离心10min,取上清液置于5ml洁净具塞试管中,60℃水浴保温30min左右,冷却待用。2.2标准曲线的制作①用200Lg/mL乳酸应用标准液同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。②各管中分别加入氢氧化钙粉末100mg,混匀,8000r/min离心5min,取上清液1.5mL,加入预先加有20mg氢氧化钙粉末的小试管中,混匀,加0.1mL20%硫酸铜溶液,称重,迅速混匀,沸水浴3min,水浴冷却,补足重量,3000r/min离心5min,各吸上清液0.5mL加入比色管中。③在各管加入25µL的4%硫酸铜溶液,混匀后置冰水浴内冷却。④将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中,每管各加6.0mL,边加边摇,混匀后置沸水浴中准确加热5min,取出后迅速置冰水浴中冷却3min左右。⑤在各管中加0.5%对羟基联苯溶液0.05mL,充分振摇后,放置0.5h,其间每10min混摇一次。⑥各管置于沸水浴中准确加热90s,立即放入冰水浴中冷却。在波长565nm处用lcm比色皿,1管作为参比,分别测定吸光度(A)。所得数据以乳酸含量为横坐标,以565nm处的光吸收为纵坐标,作标准曲线。2.3青贮样品浸提液中乳酸含量的测定取青贮样品浸提液滤液按标准曲线的测定方法,以蒸馏水为空白测定其在560nm处的光吸收,所得数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量,即为青贮样品浸提液中的乳酸含量。样品中乳酸含量=计算值×稀释倍数需要试剂:无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。需要器材:分光光度计、离心机、离心管、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
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