固体培养基上形成单独菌落,并可得到纯菌株。Р实验步骤:Р1.高氏一号合成培养基的制备Р先将可溶性淀粉称好,在小烧杯内用50~100ml水调成糊状,再在另一容器内加入900~950ml热水,将小烧杯内淀粉倒入混匀。再分别称取其它药品,并加热搅拌使之溶解后,调pH至7.2~7.4,分装,0.1Mpa(15lb/in2)15~30min高压蒸汽灭菌。Р2. 土壤中放线菌的分离Р(1)取9套无菌平皿,在皿底贴上标签,注明土壤稀释液的稀释度(10-3、10-4、10-5)、组别、姓名、操作日期等。每个稀释度做三个培养皿。然后在每皿中倒入已溶化并冷至50℃左右的高氏一号培养基15~20ml左右,待冷凝成平板。Р(2)将土样放入用酒精擦拭过的乳钵中,除去石块、草根、研磨压碎后,称取5g,放入盛有45ml无菌水的三角瓶中。振荡10min,即10-1的土壤悬液,静置30s。Р(3)另取装有9ml无菌水的试管4支,编号10-2、10-3、10-4、10-5。用无菌吸管无菌操作取10-1浓度的土壤悬液1ml并加入编号10-2的无菌试管中,并吹吸吸管2~3次,使与9ml水混匀,即为10-2浓度的土壤稀释液。依此类推,直到稀释至10-5的试管中(每个稀释度换1支无菌吸管)。Р(4)用无菌吸管从浓度最小稀释液开始,每次吸取0.5ml加到一组相应编号(10-5)的高氏一号平板上(每次吸取前,吸管要在液体内吹吸几次),Р再依次将10-4、10-3的土壤稀释液加到相应平板上。用无菌刮棒(从浓度小的稀释液开始)将加入平板培养基上的土壤稀释液在整个平板表面涂匀。Р(5)接种完毕,将平皿放入28℃恒温箱培养7天,观察平皿上放线菌(主要是链霉菌)菌落。Р(6)挑4株菌划线接种在高氏一号合成培养基斜面上,28℃培养7天,作拮抗试验用。Р准备实验内容:Р【培养基/组:200ml(制备6个平皿(本次实验用,10支试管)】
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