0\10\10\10;根据活菌含量选取两至三个梯度进行混菌或35C-37C24h,挑取一环生长快,菌落大的不同典型菌落分别转接5mL无菌水试管中,混合器混合5-lOmin,做成菌悬液梯度稀释后混菌或涂布,或直接蘸取菌悬液直接划线,37C18-20ho结合镜检直到菌落大小基本一致,转接于斜面37©18-20h,于4©冰箱保存。或将梯度菌液1汕加入平板,然后分别注入淀粉和酪素培养基中,30-37C24-48h,挑取D/d大的(淀粉培养基加碘液,观察透明圈)转接于斜面备用或用划线法进行纯化。并通过染色镜检观察,从菌落形态和细胞形态进行鉴别。2.2.3自然筛选2・2.3.1富集培养:取5g底泥或肠道内溶物0・5g,加入45(50)汕无菌水/250mL三角瓶(带玻珠)中,振荡15-20min,取5mL菌悬液或5mL水样加入45mL促芽培养基/250mL三角瓶中,75C-80C水浴15-20min,降至35C-37C150-200r/min振荡24h,染色镜检,连续两至三次培养备用。或取论底泥(土)置于20mL肉汤培养基/250mL三角瓶,八层纱布封口,7513-80X:水浴处理15-20min,然后150-200r/min振荡24ho镜检形成芽匏情况,挑取具有芽匏的菌落进行划线纯化培养,获得单菌落。2.2.3.2分离纯化取富集菌液置于75C-80r水浴15-20min,梯度稀释10=10\10\10%107,选择三个合适的梯度混菌或涂布于营养琼脂麦芽汁培养基或直接涂布于酪素培养基上初筛,也可划线分离(划线法先将平板置于30乜(24-48h)或37©(18-24h),无菌检查,表面冷凝水干燥)。得个梯度二个平皿,将平板倒置,于35C-37C24-48ho对长出的单菌落进行编号,选择生长快、菌落大,表血干燥,粗糙,不透明的菌落转接于斜面备。挑取少许菌苔涂片,做芽胞染色判断是否为芽鞄杆菌。
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