牛血清在细胞培养基中的主要功能

6孔培养盘36℃±2℃,5%二氧化碳培养10~Р15天。试验中选择一个已知参考牛血清作对照。Р克隆效率计算:Р克隆效率=(阳性孔平均数/ 培养孔总数) X100% Р相对克隆效率=待测血清克隆效率/参考血清克隆效率Рb.贴壁效率试验:Р用人的传代细胞作每批血清的贴壁效率试验,A549(人肺癌细胞)该细胞可以反应出低浓度血清的贴壁变化。采Р用6孔培养盘每批血清用两种浓度和两种不同的细胞接种数即10%血清――100细胞/孔,4%血清200介细胞/孔Р。放36℃±2℃,湿润5%二氧化碳培养箱培养10~14天,计算着色细胞克隆,确定贴壁效率。从这两种不同血清Р浓度来确立实验血清支持细胞贴壁生长的水平,分析两种试验条件下平均贴壁效率。Р贴壁效率(%)=(每孔克隆平均数/ 每孔活存的培养细胞平均数) X100%Р相对贴壁效率=被测血清贴壁效率/参考血清贴壁效率Рc. 二倍体纤维细胞促生长试验Р人二倍体细胞株 WI28 MRc5Р25cm2细胞培养瓶,5%血清,每瓶接种1.5X105细胞连传3代,每代血清浓度和接种细胞数相同,每代培养7天,每Р代接种二个细胞瓶,36℃±2℃培养。以同样条件用已知参考血清进行平行培养。每代收获细胞计数,计算每批待Р检血清与参考血清的相对生长率(RGR)。РRGR=(试验血清每瓶细胞平均数/ 参考血清每瓶细胞平均数) X100%Р牛血清主要质量要求(Sigma) Р胎牛血清新生牛血清成牛血清Р牛龄胎 10~14天<10个月Р无菌- - - Р病毒- - - Р支原体- - - Р噬菌体- - - Р内毒素(ng/ml) ≤1.0 ≤10.0 ≤10(15) Р血红蛋白(g%) 3.0~4.5 3.5~6.0 5.0~8.5 РpH 6.7~8.0 7.0~8.0 7.0~8.0 Р渗透压(mom/Kg H2O) 240~340 240~340 240~340