植物样品经浓H2SO4-H2O2消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。在一定酸度条件下,溶液中得正磷酸与钼酸络合形成磷钼杂多酸。然后加入适宜的还原剂,使磷钼酸中的一部分Mo6+离子被还原为Mo5+,生成一种“钼蓝”的物质,这是钼蓝比色法的基础。蓝色产生的速度、强度、稳定性等与还原剂的种类、试剂的适宜浓度特别是酸度以及干扰离子等有关。目前,抗坏血酸是一种被广泛采用的还原剂型。①此法的优点是操作简便,可在室温下显色,蓝色稳定。4.2试剂(1)钼锑抗试剂:A.溶液-5gL-1酒石酸氧锑钾溶液:取酒石酸氧锑钾[K(SbO)C4H4O6]0.5g,溶解与100mL水中。B.钼酸铵-硫酸溶液:称取钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]10g,溶于450mL水中,缓慢地加入153mL浓H2SO4,边加边搅。再将上述A溶液加入到B溶液中,最后加水至1L。充分摇匀,贮于棕色瓶中,此为钼锑混合液。临用前(当天),称取左旋抗坏血酸(C6H8O5,化学纯)1.5g,溶于100mL钼锑混合液中,混匀,此即钼锑抗试剂。有效期24小时,如藏于冰箱中则有效期较长。(2)2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚指示剂溶液。溶解二硝基酚0.25g于100mL水中。此指示剂的变色点为pH3,酸性时无色,碱性时黄色。(3)4mol/LNaOH溶液。溶解NaOH16g于100mL水中。(4)1mol/LH2SO4:吸取浓硫酸6mL,徐徐加入80mL水中,边加边搅拌。冷却后加水至100mL。(5)磷标准溶液:准确称取在105℃烘箱中烘干的KH2PO4(一级)0.2195g,溶解在400mL水中,加浓H2SO45mL(加H2SO4防长霉菌,可使溶液长期保存),转入1L容量瓶中,加水至刻度。此溶液为50μgmol-1P标准溶液。吸取上述磷标准溶液25mL,稀释至250mL,即为5μgmol-1P标准溶液(此溶液不宜久存)。10
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