饲用微生物制剂中粪肠球菌的检测方法

和试剂РA.1 粪肠球菌培养基РA.1.1 成分(g/L)Р 䏡胨 10.0Р 麦芽糖 20.0Р 酵母浸粉 10.0Р 甘油磷酸钠 10.0Р 氯化钠 5.0Р 乳糖 1.0Р 溴甲酚紫 0.015Р 叠氮钠 0.4Р TTC 0.1Р 琼脂 13.0РA.1.2 制法Р 溶解各成分于水中,必要时加热。调整pH值,使培养基pH值在25℃时为7.2±0.2。煮沸使用。РA.2 哥伦比亚琼脂培养基РA.2.1 成分(g/L)Р 酪蛋白胰酶消化物 10.0Р 心胰酶消化物 3.0Р 玉米淀粉 1.0Р 琼脂 13.0~15.0Р 肉胃酶消化物 5.0Р 酵母浸出粉 5.0Р 氯化钠 5.0РA.2.2 制法Р 溶解各成分于水中,必要时加热。调整pH值,使培养基pH值在20℃~25℃时为7.3±0.2。121℃灭菌15min~20min。РA.3 革兰氏染色РA.3.1 结晶紫染色液РA.3.1.1成分Р 结晶紫 1gР 95%乙醇 20mLР 1%草酸铵水溶液 80mLРA.3.1.2 制法Р 将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。РA.3.2 革兰氏碘液РA.3.2.1 成分Р 碘 1gР 碘化钾 2g Р 蒸馏水 300mLРA.3.2.2 制法Р 将碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300mL。РA.3.3 沙黄复染液РA.3.3.1 成分Р 沙黄 0.25gР 95%乙醇 10mLР 蒸馏水 90mLРA.3.3.2 制法Р 将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。РA.3.4 染色法Р 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染色1min,水洗;滴加革兰氏碘液,媒染1min,水洗,滴加95%乙醇脱色,约30s,水洗;滴加沙黄复染液,复染1min,水洗,待干,镜检。Р_________________________________