采用Hill氏方法制作新生大鼠HIBD模型[BrainRes.1995,676(2):398]。⑷模型制作后处理组立即给予雄激素干预。⑹脑组织切片免疫组化方法观察AROM、NGF、Neurocan、Phosphacan、NG2的表达。⑺制作电镜切片观察不同组别大鼠脑组织超微结构的变化。(8)总结实验结果。研究方案(1)7日龄SD大鼠随机分为实验组和对照组。(2)实验组动物建立HIBD模型:应用硫喷妥钠腹腔注射麻醉(4mg/kg)。取颈正中切口,游离左侧颈总动脉,并用1号缝合线结扎,放回窝中恢复4小时,然后置于无色有机玻璃缺氧房中,保持37℃恒温,以2-3L/min的速度输入体积分数为0.92的氮氧混合气体,持续4小时。(3)根据雄激素干预与否,将实验组分为处理组和非处理组;根据脑损伤后时间,将处理组、非处理组各分为4组,即24h、72h、7d和10d,对照组也相应分为4组,即生后8d、10d、14d和21d。四个时间段每组各取10只动物,分别进行以下实验:①免疫组化用1.33mol/L的多聚甲醛、0.55mol/L的磷酸缓冲液心脏灌注固定脑组织,脑组织在同样的多聚甲醛液中固定2-4h。将固定的脑组织制成蜡块后,选择皮层、海马等部位进行切片,用AROM、NGF、Neurocan、Phosphacan、NG2单克隆抗体分别进行免疫组化染色,显微镜下观察脑组织AROM、NGF、Neurocan、Phosphacan、NG2的表达情况。②电镜切片观察用戊二醛固定脑组织取材,进行电镜切片观察各部位雄激素干预前后神经元轴突再生情况。⑷观察以下内容:①实验组、对照组缺氧缺血后不同时间段皮层、海马部位AROM、NGF、Neurocan、Phosphacan、NG2表达的差异。②实验组、对照组缺氧缺血后不同时间段电镜下轴突再生情况的对比观察,同时观察两组动物同一时间段神经元轴突再生情况的差异
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