每种免疫组织化学染色的操作规程

,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。滴加一抗,室温或37℃孵育1-2小时或4℃过夜,PBS洗三次,每次2分钟。滴加试剂1,室温或37℃孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。滴加试剂2,室温或37℃孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着色。自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝。三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。12.SMA免疫组织化学染色操作规程查对蜡块号码,标记的项目。找出相应蜡块置冷台冷冻。切片,切片刀应保持锋利,切片厚度:3-5μm,切片保持完整,无皱褶及气泡,载玻片采用免疫组织化学染色专用防脱玻片。裱片位于玻片中下1/3处,于玻片磨砂端标记病理号及标记项目。63℃恒温箱烤片1.5-2小时。切片脱蜡,三级二甲苯,每级5分钟,三级酒精,每级5分钟。水洗两次,蒸馏水洗两次,PBS洗三次,每次2分钟。。3%过氧化氢去离子水孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗三次,每次2分钟。滴加一抗,室温或37℃孵育1-2小时或4℃过夜,PBS洗三次,每次2分钟。滴加试剂1,室温或37℃孵育20分钟,PBS洗三次,每次2分钟。滴加试剂2,室温或37℃孵育20-30分钟,PBS洗三次,每次2分钟。应用DAB溶液显色。DAB显色液配制:蒸馏水1ml,试剂A(浓缩缓冲液)、试剂B(浓缩DAB溶液)、试剂C(浓缩过氧化氢溶液)各一滴,混匀。滴加于组织片上,镜下控制着色,显色完全后水洗终止着色。自来水充分冲洗,苏木素复染5分钟,1%盐酸酒精分化,流动水冲洗返蓝。三级酒精,每级5分钟,三级二甲苯,每级5分钟。切片晾干后封片。