农杆菌介导法转化金针菇不同受体效率比较

Р No. of total transformants转化效率(%) Р Transformation efficiency1)总转化子数Р No. of total transformants转化效率(%) Р Transformation efficiency1) Р 原生质体Р Protoplast3221.876230.64 Р 菌丝碎片Р Mycelium16738.32**19640.31** Р **表示差异达P 0.01 水平Р **Significant difference at P 0.01 level, 1)Transformation efficiency = No. of positive transformants/No. of total transformants×100% Р 3讨论Р 分别以金针菇双核体菌株G1、单核体菌株Dan3菌丝碎片以及原生质体为转化受体,农杆菌介导转化金针菇结果显示:以受体双核体菌株G1菌丝碎片的转化效率最高,单核体菌株Dan3菌丝碎片转化效率次之,而单、双核体菌株原生质体为受体的转化效率都显著低于以菌丝碎片为受体时的转化效率。DE GROOT 等的研究结果也显示,原生质体并不是高效的转化受体[21]。笔者推测,打碎后的菌丝片段的再生菌丝比较幼嫩,作为受体感受态易于被农杆菌侵染,且打碎后的菌丝的再生能力比较强;而以原生质体为受体,在原生质体制备过程中需要混合水解酶消解坚硬的真菌细胞壁,而消解细胞壁的效率直接影响原生质体的再生能力[22-24];另外,在共培养阶段,裸露的原生质体和农杆菌在一定温度下要持续36 h,这可能在一定程度上减弱了原生质体的再生能力。因此,实验结果中以菌丝碎片为受体的总转化子数显著高于原生质体的总转化子数。笔者试验结果显示,双核体菌株的菌丝碎片是最适合根癌农杆菌介导法转化金针菇的转化受体。