染色液(G-250)、蒸馏水、相体积比实验中分离得到的上下相、可见分光光度计、恒温水浴锅、移液管、试管及试管架等四、实验步骤: (1)制作标准曲线:Р ①取6支试管,用移液管分别准确加入牛血清蛋白溶液(120μg /ml)体积为0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml,然后均用蒸馏水稀释至1.00ml。②再分别加入5.00ml考马斯亮蓝染色液,混匀。Р ③于25℃±1℃的恒温水浴锅中保温10min(为防止试管歪倒或混淆,可把水浴锅盖子打开,将试管同试管架一起水浴)。Р ④冷却后,于595nm进行测定吸光值,以装有1.0ml蒸馏水的试管为对照。Р ⑤然后,以以试管中中蛋白质总量(μg)为横坐标,以相应的吸光值(OD595nm)为纵坐标作图,得标准曲线。(注意所得6点至少应有3点在同一直线上,否则标准曲线不可用,应参照其他组线性较好的标准曲线进行计算)Р (2)样品测定:(若颜色太深,一般要重新取样品再做)Р 上相溶液:用吸管吸取上相液Xml,蒸馏水定容至1.00ml,按(1)法测定吸光值。下相溶液:用吸管慢慢插入离心管底部,吸取下相液Yml,蒸馏水定容至1.00ml,按(1)法测定吸光值。(以上样品取的ml,往往要根据具体情况来调整。参考值:1、3只刻度离心管,上相取0.1ml,下相取0.4 ml,2、4只刻度离心管,上相取0.3ml,下相取0.3 ml) 可按下表操作:Р 五、结果分析与讨论Р 6Р 1、相比和分配系数如何影响蛋白质的收率?Р 2、要想获得准确实验结果,应注意哪些问题?Р 3、PEG分子量如何影响蛋白质的分配系数?Р 实验六离子交换树脂的预处理及总交换容量的测定(第三次实验)Р 一、实验目的和要求Р 1、通过实验加深对离子交换树脂的重要性能之一—总交换容量的认识。Р 2、掌握离子交换树脂的作用原理。Р 3、学会离子交换树脂的预处理方法。
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