放入一个无菌平皿内,每个样品作两个稀释度,每个稀释度作两个平皿为平行样.Р 5. 于每个平皿中倾注15毫升左右已经融化并冷却到45℃左右的营养琼脂(化妆品的监测需用卵磷脂-吐温80营养琼脂),立即在平面上旋转平皿,使样品与琼脂充分混匀.每次检验时另用一个平皿只1毫升加灭菌生理盐水和15毫升营养琼脂作空白对照.Р 6. 待琼脂冷却凝固后,翻转平皿,使底面朝上,置37℃温箱中培养24小时后取出,计算平皿内菌落数,以同一稀释度的两个平皿内平均菌落数计算.Р 六,注意事项Р 1. 全部操作过程必须无菌.Р 2. 采集的样品应根据可能的细菌污染程度进行倍比稀释,并选择两个最适稀释度检验.如自来水以检测原倍水样为宜,一般的物体表面以1:10和1:100稀释较为合适,而化妆品应进行1:1000稀释,散装鲜牛奶以1:10000为宜.Р 3. 营养琼脂的温度不能过高和过低,而且必须与样品充分混匀.Р 七,菌落计数及报告方式Р 平皿菌落计数可用肉眼观察,必要时用放大镜观察,注意菌落与杂质的区别.Р 1. 计算同一稀释度的平均菌落数,若其中一个平皿内有较大片状菌落生长则不计该平皿;若片状生长的菌落未超过平皿的一半时可按菌落分布均匀的另一半平皿菌落数×2计算.Р 2. 先计算平均菌落数在30-300之间的平皿,如只有一个稀释度的平均菌落数在此范围,则以该平均菌落数乘以其稀释倍数报告.若有2个稀释度的菌落数在此范围,则应按二者的比值来决定,若比值≤2则报告两者的平均数,比值>2则报告其中较小稀释度的菌落数.Р 3. 如所有稀释度的菌落数均>300,则报告最高稀释度的平均菌落数乘以其稀释度.Р 4. 如所有稀释度的菌落数均100时采用二位有效数字的以10的指数形式表示.Р 7. 如菌落难以计数则应报告\"无法计数\"并注明稀释倍数.Р 八,结果计算Р CFU/毫升或克=平均菌落数×稀释倍数
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