简单、快速、敏感性高、需要样本量少、适合大量样本筛选等优点。(5) 变性梯度凝胶电泳是一项根据 DNA 解链特性分离鉴定 DNA 片段的技术。变性梯度凝胶电泳需要制备新鲜的梯度胶, 检出率也较低, 且只能确定突变的存在, 不能进行突变位置和性质的定量分析。但变性梯度凝胶电泳无需知道待测片段的 DNA 序列, 无需制备测试引物。(6) 变性高效液相色谱技术是一种新的高通量筛选 DNA 序列变异的技术, 其利用离子对反向高效液相色谱原理, 通过一个 DNA 分离柱进行核苷酸片段的分离和分析。该方法具有自动化、快速、检出率高、检测 DNA 片段大小范围广等优点。然而,DHPLC 也存在一些缺点:①不能检测纯合突变;②只能提示突变的存在, 无法确定具体的错配类型及位置;③许多片段有多个主要解链温度, 需要筛查的温度点较多, 增加了工作量。(7) 实时荧光定量 PCR 技术是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团, 利用荧光信号累积实时监测整个 PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。此法可快速定量检测异质性 mtDNA, 比多态性分析检测低频率突变体更为精确。(8) 其他基质辅助激光解离吸附飞行时间质谱、基因芯片等检测碱基变异的方法也都可以用于 mtDNA 异质性的检 9 测。 5 结束语综上所述, 线粒体是细胞能量的主要来源, 对维护细胞正常生理功能起着重要作用。线粒体与氧自由基的产生、细胞死亡进程的调控有关。许多毒物可以通过脂质过氧化作用对线粒体膜、膜蛋白及线粒体 DNA 造成损伤, 线粒体损伤和功能障碍与许多疾病的发生有密切关系。这种损伤往往发生在对能量要求较高的处于有丝分裂的组织如心肌、大脑等。因此对线粒体结构功能损伤的检测, 特别是从亚细胞和分子水平研究线粒体损伤的结构功能变化, 对阐明与线粒体受损有关的细胞功能障碍及疾病的发病机制有着重要的意义。 10
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