要的生物信息分子核酸是分子生物学研究的主要对象,因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作核酸样品的制备质量直接影响后续的研究与应用核酸的存在形式核酸包括DNA、RNA两种分子,在细胞中都是以与蛋白质结合成核蛋白,即DNP和RNP。真核生物的染色体DNA为双链线性分子原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子有些噬菌体DNA有时为单链环状分子病毒的DNA、RNA分子,其存在形式多种多样,有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状等。核酸的分布95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内,其它5%为细胞器DNA,如线粒体、叶绿体等。RNA分子则主要存在于细胞质中,约占75%,另有10%在细胞核内,15%在细胞器中。核酸的理化性质DNA则为白色类似石棉样的纤维状物DNA、RNA和核苷酸都微溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂在酸性溶液中,DNA、RNA易水解,在中性或弱碱性溶液中较稳定DNA溶液的粘度很大,而RNA溶液的粘度小得多。核酸发生变性或降解后其粘度降低核酸受到强大离心力的作用时,可从溶液中沉降下来,其沉降速度与核酸的大小和密度有关。分离纯化核酸总的原则保证核酸一级结构的完整性尽量排除其它分子的污染分离纯化核酸的目的除去PCR的抑制物增加靶核酸的浓度增加样本的均一性核酸提取的基本步骤核酸的释放核酸的分离与纯化核酸的浓缩、沉淀与洗涤核酸的释放(破细胞)物理法:Al2O3粉、玻璃珠研磨、液氮破碎法化学法:去污剂、蛋白质变性剂生物法:溶菌酶、蛋白酶核酸的释放(破细胞)通常几种方法结合使用高等动植组织:液氮破碎法:在组织块中加入液氮(-196℃),组织变脆,在低温下捣碎,加入蛋白酶K、阴离子去污剂,可制备大量完整的高分子量的DNA、RNA细菌材料:不宜采用物理法,常用溶菌酶+去污剂动物细胞或细胞器:首先加入DNase或RNase抑制剂,再用蛋白酶K+去污剂
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