临床PCR检验标本的采集、处理、保存及核酸提取方法

Р临床PCR检验操作中最易出问题的环节Р4Р标本采集Р标本采集时间对扩增检测结果的影响(过早或过晚都可能会出现假阴性结果) ?标本采集部位的准备(适度消毒) ?标本的类型和采集量(衣原体上皮细胞)?采样质量的评价(评价方法:肉眼观察、显微镜下观察和化学分析) ?采样及运输容器(一次性无菌器材,防腐剂,抗凝剂) ?标本采集中的防污染(一次性无菌容器,防止混入操作者头发,表皮等,如玻璃容器要高压灭菌)Р5Р标本运送Р样本一经采集,则应尽可能快的送至检测实验室。?样本中如加入了适当的稳定剂,如用于RNA测定加入GITC的血清(浆)样本和用于DNA测定的EDTA抗凝血等,则可在室温下运送或邮寄。?实验室应根据待测靶核酸的特性,对各种临床样本的运送条件作出相应的规定。Р6Р临床标本的处理和保存Р血清(浆)?全血?外周血单个核细胞?痰?棉拭子?脓液?体液?乳汁?组织Р7Р血清(浆)РDNA测定,可按照一般的血清标本处理程序,对测定影响不大。?RNA测定,标本的获取和保存方式对测定结果,可能有决定性影响。最好是使用EDTA抗凝(严禁使用肝素,因其对PCR扩增有抑制,且很难在核酸提取过程中完全去除)全血标本,抗凝后6小时内分离血浆,如使用血清标本,则需尽快(2小时内)分离血清,标本的短期(1~2周)保存可在-20℃下,较长期保存应在-70℃下。Р8Р全血Р以全血作为待测标本时,必须注意抗凝剂的选择,一般使用EDTA-Na2或枸椽酸钠,不可使用肝素。?全血样本如用于DNA提取检测,可4℃下短期保存,如用于RNA检测,则应在取血后,尽快提取RNA 。Р9Р外周血单个核细胞Р外周血单个核细胞可从抗凝全血制备,主要有两条途径,一是使用淋巴细胞分离液分离制备;二是使用红细胞裂解液,裂解全血中的红细胞,经生理盐水数次洗涤,即可得到单个核细胞。?外周血单个核细胞如暂不提取核酸,可保存于-70℃下.Р10