外吸收。如果用分光光度法测定,杂质会对含量测定的准确性造成干扰。因此,可采用具有分离能力的高效液相色谱法将被测物和杂质分离开测定,则杂质对被测物含量测定的干扰即被消除。试剂与器材高效液相色谱仪色谱柱:ODS柱(150mmх4.6mm,5um)流动相:甲醇-水(40:60)流速:1.0ml/min检测波长:257nmSGE50ul微量注射器实验步骤1、配制对照品溶液2、样品溶液的配制3、进样分析4、记录格式5、结果计算标准品溶液的配制:分别取母液(1mg/ml)5ml,4ml,3ml,2ml,1ml,加入标号5-标号1的100ml容量瓶中,并用去离子水稀释至刻度,摇匀。用注射器吸取标准品1ml,过0.45um滤膜,滤液转移到1.5mlEP管中,分别标记。用微量注射器进样,记录色谱图的峰面积和出峰时间。注意!0.45um滤膜可重复使用,但须反复润洗!供试品溶液的配制:精密称取对乙酰氨基酚粉末3mg,置100ml的容量瓶中,加适量去离子水,振摇,60℃水浴水解40min,放冷10min,待基本溶解完全,加去离子水至刻度,摇匀即得。进样分析:用注射器吸取供试品约1ml,经过0.45um滤膜,滤液转移到1.5mlEP管中。用微量注射器吸取EP管中供试品0.1ml,进样。记录色谱图的峰面积。供试品浓度的计算将标1-标5按浓度-峰面积对应关系做标准曲线,将供试品峰面积带入标准曲线求出供试品浓度。注意事项1.此实验过程中应注意进样量的一致,因此,采用注射过量的样品体积,通过进样环(loop)来定量进样。2.如果出现色谱峰分离不完全的现象,则可以通过调整色谱柱的长度,调整流动相中甲醇和水的比例,以改善分离效果,使杂质峰和样品峰完全分离。思考题1.我们欲每次进样20ul,为何却要进样100ul?为什么测定扑热息痛片剂中的对乙酰氨基酚时需要长时间水解?请简述高效液相色谱仪的主要结构(图解也可)。
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