备一、颗粒性抗原的制备二、可溶性抗原的制备三、人工抗原的制备第二节免疫佐剂一、佐剂的种类二、佐剂的作用机制第三节抗血清的制备一、免疫动物的选择二、免疫方法三、动物采血法2第五节抗血清的鉴定和保存一、抗血清的鉴定二、抗血清的保存第四节抗血清的纯化一、特异性抗体的纯化二、IgG类抗体的纯化3抗体种类:第一代抗体多克隆抗体(polyclonalantibody)第二代抗体单克隆抗体(monoclonalantibody)第三代抗体基因工程抗体(icengineeringantibody)4免疫原(immunogen)是能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的的抗原。颗粒性抗原-细胞、细菌、寄生虫可溶性抗原-蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸第一节免疫原的制备51.绵羊红细胞抗原的制备:物理抗凝,洗涤3次106/ml2.细菌抗原的制备:菌体抗原100℃2-2.5h、鞭毛抗原0.3-0.5%甲醛处理、毒素抗原0.5-1%氯化钙处理一、颗粒性抗原的制备要求:颗粒性抗原悬液呈浑浊状或乳浊状,免疫时多采用静脉内免疫法6组织匀浆的制备:高速捣碎法-组织捣碎机捣碎(新鲜或低温保存组织)研磨法-用玻璃匀浆器(脑、胰)(一)组织和细胞可溶性抗原的粗提二、可溶性抗原的制备7细胞的破碎:冻融法--20℃冻结,然后室温融化超声破碎法-超声波(1~20kHz)酶处理法-溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶表面活性剂处理法-SDS、去氧胆酸钠、二乙基十六烷基溴81.超速离心法:差速离心法-低速和高速离心交替进行密度梯度离心法-区带离心法(二)可溶性抗原的提取和纯化适用范围:少数大分子抗原(IgM、C1q、甲状腺球蛋白)以及某些比重比较小的抗原(如载脂蛋白A、B)的提取和纯化92.选择性沉淀法:盐析法-硫酸铵、硫酸钠有机溶剂沉淀法-乙醇、丙酮聚合物沉淀法-聚乙二醇(PEG)核酸沉淀剂法-氯化锰、硫酸鱼精蛋白、链霉素10
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