倍,即成1%的鸡红细胞悬液,放置于4 ℃备用。РHA实验Р先将待检病毒材料稀释成不同的稀释倍数,再加入1%的鸡红细胞,混匀,4 ℃静置后观察结果。在出现血凝现象的各稀释孔中,能使红细胞出现完全凝集的病毒的最大稀释倍数即定为病毒的凝集价。又称为该病毒的血凝滴度。?判定标准:?(+)凝集反应者,凝集的红细胞呈薄膜状,均匀的铺满孔底。?(-)红细胞全部沉于孔底中央,周围无散在的红细胞。Р孔号Р1Р2Р3Р…….Р10Р11Р对照Р病毒稀释倍数Р21Р22Р23Р…….Р210Р211Р(1)生理盐水或PBSР25Р25Р25Р……..Р25Р25Р25Р(2)病毒Р25Р25Р25Р……..Р25Р25Р弃去25Р(3)生理盐水或PBSР25Р25Р25Р……..Р25Р25Р25Р(4)1%红细胞悬液Р25Р25Р25Р……..Р25Р25Р25Р振荡混匀, 4℃或室温温箱作用,10分钟开始观察,直到结果出现。РHA的实验步骤Р病毒的红细胞凝集抑制试验(HI)Р(1) 凝集抑制价的含义及判定?(2)4单位病毒的配制?(3)HI实验与步骤Р凝集抑制价的含义及判定标准РHI试验:病毒的红细胞凝集现象,可以被特异性免疫血清所抑制,称HI试验。?抗体效价:出现红细胞凝集完全抑制现象的血清的最大稀释倍数叫抗体效价,又称该血清的 HI滴度。?判定标准:?(+)即出现红细胞凝集被抑制者,红细胞全部沉于孔底中央,周围无散在的红细胞。?(-)凝集的红细胞呈薄膜状,均匀的覆满孔底,有的似有红细胞沉积于中央。Р4单位病毒的配制Р1单位病毒将病毒按其血凝滴度进行稀释后所得的病毒液为1单位病毒。?4单位病毒即将一个血凝单位的病毒增加至4倍浓度,例如一个血凝单位为1:64,4个血凝单位则为64/4=16倍稀释。?注意:4单位病毒配制好后,还需要进行HA实验验证,测定其血凝价是否为4,而后再进行下一步实验。
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