干血片苯丙氨酸荧光测定及质控

干血片苯丙氨酸荧光测定法佛山市新生儿疾病筛查中心刘海平一、苯丙酮尿症筛查的实验方法自从1934年挪威Folling报告苯丙酮尿症(PKU)后,实验检测方法也越来越多,越来越先进,最早的是1961年美国的Guthrie建立的三氯化铁试验。一、苯丙酮尿症筛查的实验方法目前用于PKU筛查的方法主要有:?1.    细菌抑制法?2.    荧光分析法?3.    酶法?4.    高效液相色谱法?5.    氨基酸分析法?6.    高效毛细管电泳法?目前我国苯丙酮尿症筛查的实验方法主要是细菌抑制法和荧光分析法。我们省大都使用荧光分析法。苯丙氨酸荧光测定法一、原理1、aman和Robins在1962年建立的测定法,aman和Robins法。四十年来不断改正和完善,现已有专门的荧光检测仪及相配套的试剂盒。它比细菌抑制法更灵敏、更快速、操作更方便。绝大多数国家和地区使用此方法,并延续至今。1、原理从干滤纸血片上先提取出的苯丙氨酸,与茚三酮形成一种荧光化合物。苯丙氨酸茚三酮荧光化合物1、原理加入二肽L亮氨酸—L丙氨酸后可大大提高此荧光反应。用琥珀酸盐缓冲液严格控制反应条件pH值在5.8土0.1,可保证理想的荧光值和最大的特异性。荧光化合物L亮氨酸L丙氨酸荧光化合物1、原理加入铜试剂稳定荧光复合物并终止反应,在485nm波长处测定荧光强度。激发光波长390nm。其苯丙氨酸含与荧光强度成正比,即苯丙氨酸含量越高荧光强度则越强,通过检测已知浓度的标准血斑的荧光值并绘制曲线则可求得各样本的苯丙氨酸浓度。2、特点:①荧光物质苯丙氨酸—茚三酮复合物,吸收特定波长(390nm)的光能后,发生原子重排,同时发射出波长(485nm)更长的光。激发光波长390nm发射光波长485nm荧光化合物