分光光度法基本原理

和吸收物浓度之间也具有类似的关系。A∝ cР二者的结合称为朗伯—比耳定律,其数学表达式为:Р朗伯—比耳定律数学表达式РA=lg(I0/It)= εb c ?式中A:吸光度;描述溶液对光的吸收程度;? b:液层厚度(光程长度),通常以cm为单位;? c:溶液的摩尔浓度,单位mol·L-1;? ε:摩尔吸光系数,单位L·mol-1·cm-1;? 或: A=lg(I0/It)= a b c ? c:溶液的浓度,单位g·L-1? a:吸光系数,单位L·g-1·cm-1 ? a与ε的关系为:? a =ε/M (M为摩尔质量)Р透光度(透光率)TР透过度T : 描述入射光透过溶液的程度:? T = I t/ I0?吸光度A与透光度T的关系:? A = -lg TР朗伯—比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各种光度法的吸收测量;? 摩尔吸光系数ε在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度;? 吸光系数a(L·g-1·cm-1)相当于浓度为1 g/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。Р2.摩尔吸光系数ε的讨论Р吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数;? 不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时,ε仅与吸收物质本身的性质有关;? 可作为定性鉴定的参数;? 同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数,常以εmax表示。εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力,也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。Р摩尔吸光系数ε的讨论Рεmax越大表明该物质的吸光能力越强,用光度法测定该物质的灵敏度越高。ε>105:超高灵敏;? ε=(6~10)×104 :高灵敏;? ε<2×104 :不灵敏。?ε在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。