种、羊膜腔接种途径等,应根据需要选择适当的途径。Р卵黄囊Р胚体Р羊膜囊Р绒毛尿囊腔Р气室Р鸡胚结构模式图Р器材及试剂:?病毒:鸡新城疫病毒弱毒疫苗株;?鸡胚:9-11日龄白壳受精卵;?孵化器、检卵灯、钢针、注射器、2.5%碘酒、?75%乙醇、固体石蜡、眼科剪、眼科镊等。Р实验步骤:?1 .准备鸡胚:接种前用检卵灯观察是否为受精卵? 及其活力。?2 接种(绒毛尿囊腔途经):? (1)在检卵灯下,用铅笔勾出气室及胚胎的? 位置,并在尿囊膜血管较少的地方作记号。? (2)消毒:用碘酒消毒气室蛋壳,酒精脱碘,? 用灭菌钢针在记号处打一孔。Р(3)接种病毒:用18mm针头的1ml注射器吸? 取鸡新城疫病毒,针头通过打出的孔进针,刺入尿囊腔,注入0.1ml。?(4)用融化的石蜡封闭小孔,39℃孵化器中? 孵化72h。Р3 收获:? 接种后每4小时照蛋一次,弃去24h内死亡胚。? (1)鸡胚放入普通冰箱内冷藏12h,使胎血凝固。? (2)分别用碘酒和酒精消毒卵壳,用灭菌剪刀除去气室卵壳及壳膜,撕开下面的尿囊膜。? (3)将鸡胚稍倾向一侧,用灭菌吸管吸出尿囊液待检。? (4)观察鸡胚的发育及是否有无病变。Р(一)血凝试验(HA):取96孔板,按以下步? 骤操作:?1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul,第二排1-12? 孔加生理盐水50ul为红细胞对照;?2、吸50ul病毒液于第一排第1孔,混匀后取50ul? 至第2孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,各? 孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12 。Р实验步骤Р3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细? 胞50ul,微型震荡器震荡2min混匀。?4、室温静置10-30分,观察结果。?5、结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数,作为病毒的血凝价,即HI效价,用2n表示。
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